Laboratoire L1-L2-L3
Plateforme de culture cellulaire
Mots Clés: Cellules humaines (primaires & lignées) – Bactéries – Virus (VIH & SARS-CoV2) – Pharmacologie anti(rétro)virale – Mécanismes de résistance aux antiviraux et antibiotiques.
Laboratoires L2
Les laboratoire de culture cellulaire L2 (3 PSM) et bactériologie L2 (4 PSM) ont pour objet de permettre l'établissement et l'entretien de lignées cellulaires (CEM, HEC, HELA, NIH3T3, B16, etc.) ou de cultures primaires humaines ou d'origines animales (principalement lymphocytes, monocytes et macrophages) de classes 1 et 2 ainsi que la culture de cellules bactériennes de classes 1 et 2 (E. coli, S.aureus, P. aeruginosa...).
Le L2 microscopie/imagerie cellulaire (3 PSM) est lui consacré à des expériences de microscopie optique (fluorescence) confocale sur des cellules procaryotes ou eucaryotes supérieures de classes 1 et 2.
Laboratoire L3
La plateforme L3 (8 PSM, 4 étuves à CO2, 2 cytomètres analyseur : BD FACSCelestaTM BYGV et FACS Calibur) est une structure destinée à la manipulation des micro-organismes pathogènes de classe 3 mais ne présentant pas de risques pour l'environnement. Ce laboratoire de haute sécurité offre la possibilité de mettre en œuvre des projets impliquant la culture de cellules infectées, la production virale et la transgénèse des cellules eucaryotes. Le laboratoire L3 s'étend sur 100 m2 et comporte deux lobes de travail indépendants (4 PSM/lobe) permettant l'accueil de pathogènes différents. Les deux lobes indépendants permettent la manipulation d’agents pathogènes ayant des modes de transmissions différents:
• Soit par contacte cutané et transmission sanguine (Lentivirus VIH).
• Soit par aérosol (Coronavirus SARS-CoV-2).
Le laboratoire L3 permet des manipulations consacrées à des études fondamentales et pharmacologiques avec la mise en œuvre de techniques permettant le suivi de la réplication basées sur:
• La détection du matériel génétique (ADN et ARN) par qPCR ou RTqPCR.
• La réplication des agents pathogènes par tests colorimétriques et de cytomètrie en flux.
Il permet également des manipulations consacrées à l’utilisation des lentivirus comme outils pour délivrer un gène d’intérêt ou moduler son expression dans les cellules.
• Établissement de lignées cellulaires dans le cadre d’études en cancérologie.
• Modification d’expressions de protéines cellulaires impliquées dans les cycles de réplications du HIV ou Covid 19 (confirmation de cibles pharmacologiques).
Il fonctionne comme une plateforme locale de production de vecteurs viraux destinés aux études fondamentales menées par des équipes académiques ou privées. Les collaborations sont menées selon principalement 2 axes. Le 1er a trait au savoir-faire développé au LBPA, depuis 25 ans, en pharmacologie antivirale. Nous proposons un ensemble de systèmes cellulaires et de techniques de biologie moléculaire qui permettent de tester l'action de composés antiviraux et des mécanismes de résistance. Le 2nd met en jeu un ensemble d'outils viraux (navettes virales) développés ou implantés au laboratoire. Ces outils ont pour but de moduler l'expression des gènes dans les lignées cellulaires ou les cultures primaires afin de mettre en évidence leurs implications dans des mécanismes tumoraux ou d'infections virales.
La plateforme met également en place des nouveaux outils en relation avec la plateforme de biophotonique et d’imagerie cellulaire. Pour exemple, le développement récent d’une gamme de vecteurs rétroviraux permettant de marquer différents compartiments cellulaires (noyau, mitochondrie, réticulum endoplasmique, golgi) avec différentes protéines fluorescentes de couleurs d'émission distinctes (GFP, RFP, CFP).
Nous pouvons soit réaliser les projets soit accueillir une équipe pour qu'elle réalise ses propres expériences (après formation aux règles de sécurité et à l'utilisation des différents équipements). Les projets peuvent être réalisés soit dans le cadre d'une collaboration scientifique soit dans le cadre d'une prestation de service (le prix est évalué en fonction du cahier des charges). Ce principe de fonctionnement s'applique aussi bien aux collaborations externes (recherche académique ou privée) qu'internes au sein de l’ENS PS. De façon générale, la gestion de la plateforme s'appuie sur un comité local d'utilisateur sous la responsabilité de Frédéric Subra (IR1 CNRS).