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ENS Cachan - Laboratoire de biologie et de pharmacologie appliquée (LBPA)

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Imagerie cellulaire

La plateforme d'imagerie cellulaire de l'institut d'Alembert permet l'observation de phénomènes biologiques et biophysiques, intra et intercellulaires de type mammifère, végétal et bactérien in vitro et in cellulo. Les différentes microscopies sont adaptées à la pluridisciplinarité de l'institut.

La plateforme d'imagerie cellulaire comprend une première salle où se trouve un microscope confocal Leica SP2 et une seconde située au rez de chaussée de l'institut d'Alembert où se trouve un microscope confocal Leica SP8 et un microscope Zeiss AxioObserver avec un module TIRF (total internal reflection fluorescence).

  • Le poste de microscopie confocale Leica SP2 dans un environnement L2 est équipé d'un contrôle en température et en CO2 qui permet l'observation de cellules vivantes. Différentes longueurs d'ondes d'excitation sont disponibles : 458, 476, 488, 514, 543 et 633 nm. Des expériences de FLIM (imagerie par temps de vie de fluorescence) se font grâce à une carte Becker Hickel 830. En addition, un laser femtoseconde IR Mai Tai ajustable entre 720 et 920 nm permet une excitation bi-photonique. Plusieurs détecteurs sont disponibles: 3 détecteurs analogiques et 1 en comptage de photon unique. Trois grossissements sont possibles : 10x 63x et 100x. Les mesures par temps de vie de flurorescence permettent également d'appréhender les interactions de biomolécules in cellulo par FRET (fluorescence/Förster resonance energy transfer). Le couplage avec le laser pulsé femtoseconde permet également d'appréhender la photoactivation par excitation multiphoton (dans l'infra rouge) de processus biologiques comme par exemple le déclenchement photo-contrôlé (i) du transfert d'électron au niveau de la NO-synthase en ciblant cette dernière par des dérivés du NADPH photoactivables ou bien encore (ii) du processus d'apoptose par des composés ciblant les mitochondries. Dans les deux cas, les composés photoactivables sont caractérisés par de très bonnes sections efficaces d'absorption deux photons.
  • Le poste de microscopie confocale Leica SP8 est équipé de deux détecteurs analogiques et d'un détecteur de type Hybride permettant des mesures quantitatives. Les nombreuses longueurs d'ondes disponibles sont 405, 458, 476, 488, 514, 543 et 633 nm qui permettent l'excitation de nombreux fluorophores. Trois grossissements sont possibles : 10x 63x et 100x.
  • Le microscope Zeiss AxioObserver est muni d'un module TIRF. Cette microscopie de haute résolution permet l'observation dynamique de phénomènes rapides en faible profondeur (environ 200 nm). Une camera EMCCD Evolve 512 permet une acquisition très rapide ( > 100 images par seconde). Deux diodes lasers permettent l'excitation des fluorophores les plus courants, 450 et 560 nm.

De nombreuses et très diverses thématiques sont abordées : cancer (effet du biphénol A sur les cellules cancéreuses), pharmacologie, bioenvironnement (biofilm et dispersion bactérienne), biofuel de dernière génération (synthèse de lipides d'intérêts par des micro algues), trafic et localisation intracellulaire (petites GTPases), thérapie photodynamique (déclenchement de la mort cellulaire par photoactivation multiphotonique),...

Exemple de réalisation:


  • Chennoufi R. et al. "Mitochondria-targeted Triphenylamine Derivatives Activatable by Two-Photon Excitation for Triggering and Imaging Cell Apoptosis." Sci. Rep. (2016) 6:21458.
  • Chennoufi R. et al. "Differential Behaviour of Cationic Triphenylamine Derivatives In Fixed and Living Cells." Chem. Commun. (2015) 51, 14881-14884.
  • Li Y. et al. "Rational design of a fluorescent NADPH derivative imaging constitutive nitric-oxide synthases upon two-photon excitation." Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A (2012) 109, 12526-31.


Liste des équipements :

  
-  Confocal Leica SP2 + laser femtoseconde
- Confocal Leica SP8
- Zeiss AxioObserver avec module TIRF.

Localisation :

- Bâtiment d'Alembert 2° étage, salle  A2-04

- Bâtiment IDA , rez de chaussée, salle  H9